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A los 40 o 50 años ya la próstata deja de cumplir su función y comienza a dar problemas.

Sci Am ; Effect of fixation on the amplification of nucleic acids from paraffin-embedded material by the polymerase chain reaction.

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J Histochem Cytochem ; Genome Res ; 6: Real time quantitative PCR. Oligonucleotides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization.

La biología molecular en el estudio de la inmunopatología

PCR Methods Appl. Quanti-tative PCR. Clin Chem Lab Med.

J Virol Methods ; Clin Lab Med ; Evaluation of the Nucli-sens Basic Kit for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in genital tract specimens using nucleic acid sequence-based amplification of 16S rRNA. J Clin Microbiol ; Comparison of three nucleic acid amplification assays of cerebrospinal fluid for diagnosis of cytomegalovirus encephalitis.

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Nucleic acid testing: update and applications. Sem Hematol ; Branched DNA signal amplification for direct quantitation of nucleic acid sequences in clinical specimens.

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Adv Clin Chem ; Impact of viral load testing on patient care. Arch Pathol Lab Med ; J Clin Microbiol ; b Molecular testing in the diagnosis and management of hepatitis C virus infection.

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Stein B, Gowda S Lifson et al. Human immunodeficiency virus infection of CD4-bearing cells occurs by a pH-independent mechanism. EMBO J ; The pH independence of mammalian retrovirus infection. J Gen Virol ; Gallaher W.

Detection of a fusion peptide sequence in the transmembrane protein of VIH. Characterization of the fusion domain of the human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein gp White J.

Viral and cellular membrane fusion proteins.

Annu Rev Physiol ; Identification of a major co-receptor for primary isolates of HIV Viral ADN carried by human immunodeficiency virus type 1 virions. Trono D. Partial reverse transcripts in virions from human immunodeficiency and murine leukemia viruses.

Association of integrase, matrix, and reverse trancriptase antigens of human immunodeficiency virus type 1 with viral nucleic acida following acute infction.

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Varmus H, Swanstrom R. Replication of retroviruses. The vif protein of human and simian immunodeficiency viruses is packaged into virions ans associates with viral core structures.

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Karczewski M, Strebel K. Cytoskeletal association and virion incorporation of the human immunodeficiency virus type 1 Vif protein.

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Los ácidos nucléicos son grandes polímeros formados por la repetición de 1 Importancia de los ácidos nucleicos; 2 Tipos de ácidos nucleicos; 3 Bases.

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Bukrinsky M, Haffar O. HIV-1 nuclear import: in search of a leader.

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Front Biosci ; 2:d Highly preferred targets for retrovirus integration. Pryciak P, Varmus H. Correct integration of retroviral DNA in vitro.

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Fujiwara T, Mizuuchi K. Retroviral DNA integration: Structure of an integration intermediate.

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Retroviral integration: Structure of the initial covalent product and its precursor, and a role for the viral IN protein. Goff S. Genetics of retroviral integration. Annu Rev Genetics ; Optimal infectivity in vitro of human immunodeficiency virus type 1 requieres an intact nef gene.

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The human immunodeficiency virus-1 nef gene impotencia de ácido nucleico de Google Académico a positive factor for viral infection and replication in primary lymphocytes and macrophages. J Exp Med ; Virology ; Restriction of VIH-1 production in a human astrocytoma cell line is associated with a cellular block in Rev function. Temporal patterns of human immunodeficiency virus type 1 transcripts in human fetal astrocytes.

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Annu Rev Biochem ; Recent advances and remaining problems in HIV assembly. AIDS ; S5. Jabbar M. The human immunodeficiency virus type 1 Vpu protein: roles in virus release and CD4 downregulation.

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Curr Top Microb Immunol ; The sor gene of HIV-1 is required for efficient virus transmission in vitro. Specific incorporation of cyclophilin A into HIV-1 virions.

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Cyclophilins: a new family of proteins involved in intracellular folding. Trends Cell Biol ; Luban J. Absconding with chaperone: essential cyclophilin-Gag interaction in HIV-1 virions.

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Nabel G, Baltimore D. An inducible transcription factor activates expression of human immnodeficiency virus in T cells. Harrich D, García J, Wu f et al.

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El proceso de clonación consiste en la obtención de un clon, entendido como un conjunto de elementos genéticamente idénticos entre sí, y a su precursor. Clonación Celular.

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Para ello, el fragmento de ADN o ADNc a clonar inserto se une a otro ADN vector de clonación y la molécula de ADN recombinante formada se incorpora a la célula anfitriona en cultivo donde tiene lugar la amplificación por replicación. Este proceso se conoce como transfección de genes y sus objetivos centrales son la amplificación y la expresión de los productos génicos.

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Por su parte, la expresión de los productos génicos permite el estudio de los procesos de transcripción, traducción y regulación. Los genes tienden a estar desmetilados en los tejidos donde se expresan y metilados donde no se expresan, especialmente en regiones de ADN llamadas "islotes Cpg". Multiples factores ambientales pueden modificar este proceso y constituyen elementos reguladores de la expresión genética Regulación Epigenética.

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Clonación Acelular. Es un proceso cíclico de aproximadamente unas 40 repeticiones de tres pasos que suceden a diferentes temperaturas: desnaturalización, alineamiento o fijación de los cebadores y extensión.

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Esta progresión es controlada en el tiempo y por los cambios de temperatura. Después de la amplificación el producto de la PCR puede ser detectado por medios, como la electroforesis en gel de agarosa o la electroforesis capilar. Entre las ventajas actuales de la PCR se encuentran un menor tiempo de obtención de resultados y una mayor sensibilidad. Entre las desventajas resalta que es un proceder costoso, laborioso y requiere personal altamente entrenado para su ejecución.

Este método es eficiente evaluando el polimorfismo genético impotencia de ácido nucleico de Google Académico mediadores solubles y receptores involucrados en la respuesta inmunitaria.

Su uso se amplía al rastreo de mutaciones, tipado de ADN para trasplante, detección de microorganismos infecciosos, detección de enfermedades inmunológicas de origen genético, entre otras aplicaciones.

El principio de la PCR a punto final se ha utilizado en sistemas de semicuantificación de mediadores del sistema inmune, como las citocinas, en las que el producto amplificado en diferentes diluciones se comprueba hasta su no detección, y se multiplica por el coeficiente de dilución.

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En todos los casos se establecen genes que sirven de control interno en la eficiencia de la reacción. RT-PCR en tiempo real.

Existen dos métodos fundamentales para analizar los datos de la PCR en tiempo real: la cuantificación absoluta y la cuantificación relativa.

En algunas situaciones, es innecesaria, siendo suficiente el reporte del cambio relativo en la expresión de un gen.

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Por ejemplo, determinar que un tratamiento incrementó la expresión de un gen X en 2. La cuantificación de los cambios relativos en la expresión génica utilizando RT-PCR impotencia de ácido nucleico de Google Académico tiempo real requiere de ciertas ecuaciones, asunciones y su prueba para analizar los datos adecuadamente. Para aplicar este método es necesaria la selección de un control interno y un calibrador.

El propósito de un gen como control interno es normalizar las PCRs para la cantidad de ARN adicionado a las reacciones de reverso transcripción.

En la actualidad existen varios tipos de reactivos para detectar los productos amplificados con sensibilidad similar. El gel fue teñido con 0. La diferencia entre el peso del material seco en este caso las uñas recortadas antes de la digestión, y el peso del residuo sólido remanente luego de la digestion es lo que se ha descrito como total de masa digerida 9.

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La biología molecular en el estudio de la inmunopatología. Molecular Biology in the study of Immunopathology.

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Yamila Adams Villalón, DrC. Rodisnel Rodríguez Leyva, Lic. Suharmi Aquino Rojas, Lic.

Mis encías están bastante salidas , no son bajitas como otras encías q son mas bajas

Instituto de Hematología e Inmunología. La Habana, Cuba.

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Las técnicas de biología molecular han tenido un profundo impacto en el campo de la inmunología. Han permitido dilucidar varias interrogantes sobre el funcionamiento del sistema inmune y han aumentado nuestra habilidad para entender, diagnosticar y tratar una gran variedad de enfermedades inmunológicas. Se muestra información actualizada con enfoque analítico que permite ilustrar las características de los principales métodos empleados en biología molecular y su aplicación en el impotencia de ácido nucleico de Google Académico de la respuesta inmune.

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En particular, la biología molecular ha desarrollado una armazón tecnológica que permite su aplicación en diferentes disciplinas médicas; en especial, para la inmunología ha constituido un poderoso instrumento.

La hibridación molecular es uno de los pilares de la mayor parte de las metodologías que se utilizan en el laboratorio de biología molecular.

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El método de detección de los híbridos formados depende del marcaje empleado en la sonda. El apareamiento por puentes de hidrógeno entre bases complementarias da lugar a estructuras de doble hebra de gran estabilidad.

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A mayor grado de hibridación, mayor grado de conexión evolutiva entre especies. El proceso de clonación consiste en la obtención de un clon, entendido como un conjunto de elementos genéticamente idénticos entre sí, y a su precursor. Clonación Celular. Para ello, el fragmento de ADN o ADNc impotencia de ácido nucleico de Google Académico clonar inserto se une a otro ADN vector de clonación y la molécula de ADN recombinante formada se incorpora a la célula anfitriona en cultivo donde tiene lugar la amplificación por replicación.

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Este proceso se conoce como transfección de genes y sus objetivos centrales son la amplificación y la expresión de los productos génicos. Por su parte, la expresión de los productos génicos permite el estudio de los procesos de transcripción, traducción y regulación.

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Los genes tienden a estar desmetilados en los tejidos donde se expresan y metilados donde no se expresan, especialmente en regiones de ADN llamadas "islotes Cpg". Multiples factores ambientales pueden modificar este proceso y constituyen elementos reguladores de la expresión genética Regulación Epigenética.

Clonación Acelular. Es un proceso cíclico de aproximadamente unas 40 repeticiones de tres pasos que suceden a diferentes temperaturas: desnaturalización, alineamiento o fijación de los cebadores y extensión. Esta progresión es controlada en el tiempo y por los cambios de temperatura.

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Después de la amplificación el producto de la PCR puede ser detectado por medios, como la electroforesis en gel de agarosa o la electroforesis capilar. Entre las ventajas actuales de la PCR se encuentran un menor tiempo de obtención de resultados y una mayor sensibilidad.

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Su uso se amplía al rastreo de mutaciones, tipado de ADN para trasplante, detección de microorganismos infecciosos, detección de enfermedades inmunológicas de origen genético, entre otras aplicaciones. El principio de impotencia de ácido nucleico de Google Académico PCR a punto final se ha utilizado en sistemas de semicuantificación de mediadores del sistema inmune, como las citocinas, en las que el producto amplificado en diferentes diluciones se comprueba hasta su no detección, y se multiplica por el coeficiente de dilución.

En todos los casos se establecen genes que sirven de control interno en la eficiencia de la reacción.

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RT-PCR en tiempo real. Existen dos métodos fundamentales para analizar los datos de la PCR en tiempo real: la cuantificación absoluta y la cuantificación relativa.

En algunas situaciones, es innecesaria, siendo suficiente el reporte del cambio relativo en la expresión de un gen.

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Por ejemplo, determinar que un tratamiento incrementó la expresión de un gen X en 2. La cuantificación de los cambios relativos en la expresión génica utilizando RT-PCR en tiempo real requiere de ciertas ecuaciones, asunciones y su prueba para analizar los datos adecuadamente.

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En la actualidad existen varios tipos de reactivos para detectar los productos amplificados con sensibilidad similar. Se clasifican de forma general en dos grupos: las sondas fluorogénicas y las moléculas fluorescentes, impotencia de ácido nucleico de Google Académico se unen al ADN. Entre las aplicaciones recientes de esta técnica en el campo de la inmunología encontramos el monitoreo de cambios en la expresión causada, por ejemplo, en las citocinas por la inflamación aguda o crónica de diferente origen, o la comparación entre las poblaciones celulares.

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Secuenciación nucleotídica del ADN. La consecuencia inmediata de clonar un fragmento de ADN es la posibilidad de secuenciarlo.

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Conocer la estructura primaria de sus nucleótidos permite una caracterización estructural y funcional de la molécula secuenciada. La solución que contiene al ADN marcado se divide en cuatro porciones, cada una de las impotencia de ácido nucleico de Google Académico se somete a un tratamiento químico diferente para romper las moléculas en una sola de las cuatro bases nitrogenadas.

Combinando la información obtenida con cada una de las cuatro reacciones se puede inferir la secuencia del segmento completo.

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Esta nueva plataforma de secuenciación tiene un amplio rango de aplicaciones como: secuenciación de genoma completo de novo o por resecuenciación, dianas de resecuenciación para detección de mutaciones puntuales, perfil de transcriptoma, investigaciones en microbioma o estudio de regulación de genes. El equipamiento puede estar diseñado para aplicaciones orientadas a la clínica con una capacidad de procesamiento de 10 Mb a 7.

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Se ha utilizado en trasplantología para optimizar el estudio de la histocompatibilidad de la pareja donante receptor a través del tipaje HLA por técnicas de oligonucleótidos específicos impotencia de ácido nucleico de Google Académico secuencia PCR-SSOdonde la hibridación con oligosondas marcadas, combinado con la utilización de anticuerpos contra ese marcaje, permite la identificación de las variantes alélicas presentes.

Como resultado de la aplicación de estas técnicas se dan respuestas a algunas interrogantes que existían relacionadas con las asociaciones HLA, enfermedad y al trasplante.

No tienen claros sus conceptos. Tampoco se ve que hayan estudiado algo del concepto NUCLEAR

HLA y enfermedad. El genotipo HLA puede asociarse a predisposición o protección de padecer ciertas enfermedades, frecuentemente de origen autoinmune, cuyo debut y severidad pueden estar relacionados con mecanismos que vinculan la expresión de determinados genes que codifican antígenos leucocitarios humanos.

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Los primeros estudios sobre HLA y enfermedad se realizaron en relación con la propensión a padecer enfermedades infecciosas. Teniendo en cuenta la función de estas moléculas en la presentación antigénica es claro su mecanismo.

Otro grupo de enfermedades se fueron asociando crecientemente, agrupadas fundamentalmente en: alteraciones inmunológicas inmunodeficiencias, autoinmunidad, alérgicas ; enfermedades metabólicas, tumores malignos sólidos o hematológicos, enfermedades infecciosas y parasitarias.

La asociación con enfermedad no solo se ha establecido para los genes HLA sino también con otros genes involucrados en la respuesta inmune.

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Tolerancia inmune. Un ejemplo elocuente de la integración de varias técnicas de biología molecular en la investigación en trasplante y tolerancia inmune, son las realizadas por instituciones especializadas de Londres y Estados Unidos.

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Desarrollaron una plataforma cruzada de biomarcadores para distinguir pacientes receptores tolerantes de trasplante, de pacientes con función renal estable y pacientes receptores con diferentes grados de inmunosupresión. Los primeros mostraron un perfil de expresión de genes distintivo.

Paralelamente a través de RT-PCR cuantitativa se estudió la expresión del gen Fox P3, que resultó mayor en los receptores tolerantes al trasplante, lo que refuerza la idea de una actividad reguladora activa en estos casos. Los genes que codifican a la mayoría de los sistemas de grupos sanguíneos han sido clonados.

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La mayoría de los grupos sanguíneos descritos derivan de mutaciones puntuales. La evaluación de la detección del polimorfismo simple de nucleótido es el método molecular empleado.

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No obstante, la aparición de estos sistemas de grupos sanguíneos también puede ser explicada por fenómenos de conversión génica, eventos de deleción, duplicación o entrecruzamiento unequalcrossingover. Contar con donantes y receptores de transfusión sanguínea completamente genotipados permite, al realizar la predicción serológica, menores posibilidades de aloinmunizaciones y en consecuencia, de reacciones postransfusionales. Se ha desarrollado la plataforma tecnológica que permite alcanzar estos objetivos a través del desarrollo de BioChips que utilizan ADN genómico extraído a partir de sangre humana para la tipificación de variantes alélicas de genes que codifican impotencia de ácido nucleico de Google Académico los principales grupos sanguíneos y antígenos plaquetarios.

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Inmunología plaquetaria. Los estudios iniciales usando ARNm derivado de plaquetas en la década del 80 del siglo pasado, involucraron la construcción de librerías de ADNc que identificaban muchos transcriptos presentes en las plaquetas. La preparación de un panel de plaquetas para determinar la especificidad realizando exclusión por reactividad, es complejo, pues algunos de estos antígenos tienen una frecuencia baja de expresión en la población.

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Esto se ha logrado a través tecnología recombinante con la transfección de los genes de interés. Inmunodeficiencias primarias.

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Así, se han logrado caracterizar alteraciones moleculares que afectan importantes componentes del sistema inmune, como por ejemplo: los linfocitos, los fagocitos y el complemento.

Un resultado de la secuenciación, estudio de la estructura y funcionamiento de los elementos del sistema inmune es ponerlo a disposición de la comunidad científica.

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