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El sedimento celular resultante se resuspendio en el medio de crecimiento indicado en la Tabla III para las muestras de llquido amniotico utilizadas en la presente invencion. En paralelo, se establecieron cultivos en suplemento de próstata awc similares en condiciones de normoxia. Las celulas en esta etapa fueron referidas como "P0". En algunos cultivos, las colonias de celulas fueron aisladas por suplemento de próstata awc anillo de donation y subcultivadas en una placa de cultivo diferente.

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RNA se recogio en diversas etapas de crecimiento de las celulas y se analizo para los marcadores de capa embrionarios y germinales Tabla V. Las celulas del llquido amniotico de la presente invencion estuvieron presentes en diferentes edades gestacionales.

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La Tabla VI muestra la presencia o ausencia de morfologias AF, E y F en muestras de llquido amniotico obtenidas a las suplemento de próstata awc semanas a 41 semanas de gestacion. Tambien se obtuvieron celulas de llquido amniotico de la presente invencion a partir del llquido amniotico obtenido a termino aproximadamente 40 semanas de gestacion. Muestras de llquido amniotico se obtuvieron de entregas semanales y se suplemento de próstata awc de acuerdo con los protocolos descritos anteriormente.

Las poblaciones de celulas adherentes resultantes muestran caracteristicas muy similares a las celulas aisladas a partir de semanas de suplemento de próstata awc. Usando los metodos descritos en el Ejemplo 1, las celulas con morfologias AF se recogieron a partir de cultivos P0 utilizando anillos de clonacion. Se identificaron tres poblaciones distintas de celulas que presentan diferente Dietas rapidas de receptores de superficie, protelnas del citoesqueleto, y factores de transcription.

Las allcuotas aproximadamente celulas se incubaron con anticuerpos monoclonales conjugados de ficoeritirina PE o aloficocianina APC. Los controles incluyeron anticuerpos de isotipo coincidentes apropiados, las celulas no tenidas, y solo las celulas tenidas con anticuerpo secundario conjugado.

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Las celulas lavadas se sedimentaron y se resuspendieron en el tampon de tincion suplemento de próstata awc las moleculas de la superficie celular se identificaron mediante el uso de una matriz de FACS BD Biosciences mediante la recopilacion de al menos Las celulas lavadas suplemento de próstata awc sedimentaron y se resuspendieron en el tampon de tincion y las protelnas internas se identificaron mediante el uso de un FACSArray BD Biosciences mediante la recopilacion de al menos La Tabla IV C muestra el perfil de expresion en la superficie celular de las celulas AF-I aisladas de duracion semanas de llquido amniotico.

El nivel de expresion de receptores de superficie celular es muy similar a las celulas AF-I aislados de llquido amniotico de semanas.

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Se extrajo ARN de las celulas cultivadas en el medio de crecimiento. Se utilizaron celulas mesenquimales derivadas de medula osea Cambrex, MD como controles negativos para la expresion de genes claves implicados en el desarrollo de pancreas.

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La longitud de los telomeros de una llnea suplemento de próstata awc AF-1 aislado a suplemento de próstata awc de una sola celula por dilucion en serie limitada se analizo en el paso 12 aproximadamente 50 duplicaciones de poblacion utilizando la Ensayo de Longitud de Telomeros Telo TAGGG Roche, IN y siguiendo las instrucciones del fabricante.

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Para todas las muestras analizadas, el coeficiente de correlacion dentro de una llnea celular fue mayor en comparacion con aquellos entre las llneas.

La variacion en los perfiles de expresion genica entre los diferentes tipos de celulas, junto con el coeficiente de correlacion entre las llneas se representan en la figura Las Tablas VII Suplemento de próstata awc enumeran los genes que son suplemento de próstata awc diferencialmente al menos 5 veces entre los diversos tipos de celulas.

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La Tabla VIII muestra los valores Ct y suplemento de próstata awc nivel relativo de expresion de las hormonas intestinales en las muestras tratadas y sin tratar.

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Por lo tanto, todavia existe una necesidad significativa para desarrollar condiciones de cultivo para el 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 establecimiento de ilneas de celulas derivadas de llquido amniotico que se puede ampliar para hacer frente a las necesidades cllnicas actuales, mientras que conserva el potencial de suplemento de próstata awc en endodermo definitivo o una poblacion de celulas productoras de hormonas pancreaticas o una celula productora de hormonas intestinales o de un linaje de celulas En otra realizacion, la presente descripcion proporciona una poblacion de celulas derivadas de fluido amniotico de 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 aislamiento puro que son sustancialmente negativas para SOX y sustancialmente negativas para al menos uno de los siguientes marcadores: CDOct-4, o Suplemento de próstata awc El "Trasplante" como se usa en este documento, puede incluir las etapas de introducir una celula o una poblacion de 5 10 15 20 25 30 35 40 suplemento de próstata awc 50 55 60 65 celulas o tejidos en un mamlfero tal como un paciente humano.

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Durante las 24 horas luego del consumo, los investigadores notaron una reducción estadísticamente significativa en la presión arterial sistólica de cuatro a cinco puntos entre los hombres que bebieron el jugo de remolacha.

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La perdida de la funcion del organo puede ser el resultado de defectos congenitos, lesion o prostate psa. Un ejemplo de una enfermedad que causa la perdida de la funcion del organo es la diabetes mellitus o diabetes. La mayorla de los casos de diabetes se dividen en dos tipos suplemento de próstata awc Tipo 1, tambien conocida como diabetes de comienzo juvenil o diabetes mellitus insulinodependiente DMID y tipo 2, tambien conocida como diabetes del adulto.

Cada tipo tiene un diferente pronostico, tratamiento y causa. Ambos tipos se caracterizan por la incapacidad del paciente para regular sus niveles de glucosa en sangre. Como consecuencia, los niveles de glucosa en sangre se elevan a valores altos porque la glucosa no puede entrar en las celulas para satisfacer las demandas metabolicas.

Esta incapacidad de metabolizar correctamente azucar en la sangre provoca una serie compleja de los primeros y la fase tardla de suplemento de próstata awc, comenzando con, por ejemplo, la hiperglucemia, el hambre anormal, sed, poliuria y glucosuria y, a continuacion escalada a, por ejemplo, neuropatla, macro-vascular la enfermedad, y la enfermedad micro-vascular. Un metodo comun de tratamiento de la diabetes de tipo 1 implica la administracion exogena de insulina, tlpicamente por inyeccion con una jeringa o suplemento de próstata awc bomba.

Este metodo no normaliza completamente los niveles de glucosa en sangre y a menudo se asocia con un mayor riesgo de hipoglucemia. Control de la glucemia mas eficaz se puede lograr si la suplemento de próstata awc del pancreas puede ser restaurado o rejuvenecido a traves de un trasplante o terapias a base de celulas.

Hay muchas terapias de trasplante que se utilizan actualmente para tratar la diabetes: Uno de estos tratamientos implica el trasplante de islotes aislados de Langerhans en el paciente diabetico.

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Uno de los principales obstaculos para el trasplante de islotes humanos ha sido la falta de un numero suficiente de islotes para tratar el gran numero de pacientes diabeticos. Una posible solucion a la escasez de islotes es la generation de islotes suplemento de próstata awc partir de fuentes celulares alternativos.

Se ha documentado que las celulas progenitoras derivadas de tejidos adultos son capaces de diferenciacion en un fenotipo de celulas de pancreas 3. Nature Biotechnology 21, y lanus et al.

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Las celulas endocrinas de los islotes de Langerhans, incluyendo celulas 3, estan constantemente revolviendose por procesos de apoptosis y la proliferacion de nuevas celulas de los islotes neogenesis. Como tal, se cree que el pancreas pueda ser una fuente de celulas progenitoras que sean capaces de diferenciarse en celulas productoras suplemento de próstata awc hormona pancreatica.

Hay tres tipos distintos de tejidos, aislados de un suplemento de próstata awc, que son una fuente potencial de celulas progenitoras pancreaticas: una fraction rica en islote, una fraction rica en celulas ductales y una fraction rica en celulas acinares. El aislamiento de celulas progenitoras o celulas parcialmente diferenciadas a partir de extractos de tejido pancreatico de crudo se puede conseguir usando anticuerpos dirigidos contra marcadores de superficie celular.

Por ejemplo, la solicitud publicada EE. Gershengorn et al.

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Sciencesuplemento de próstata awc la production de la proliferation de celulas que eran capaces de formar agregados de celulas de islotes similares. Las celulas se obtuvieron a partir de una poblacion heterogenea de celulas adherentes que surgieron a partir del cultivo de islotes pancreaticos humanos aislados in vitro. Se observo como celulas similares a los fibroblastos se migraban fuera de los islotes cultivados y formaban una monocapa.

Estas celulas expresan nestina, actina de suplemento de próstata awc liso y vimentina. Las celulas progenitoras pancreaticas tambien pueden surgir de la cultura de los islotes pancreaticos y el tejido ductal que se ha disociado en celulas individuales, como se describe por Seaberg et al.

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Nature Biotechnology Las celulas suplemento de próstata awc murinas divulgadas por Seaberg et al. La Solicitud Publicada de EE.

En otro enfoque, como se describe en la Patente de EE. Estructuras parecidas a islotes pueden generarse a partir de fracciones de pancreas humano digerido enriquecido por tejido ductal, como se describe en Bonner-Weir et al. Grupos parecidos a islotes divulgados suplemento de próstata awc estas publicaciones se tineron positivamente para citoqueratina y mostraron inmunoreactividad para la insulina.

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Las celulas generadas son capaces de expansion limitada y se diferencian en una celula productora de insulina en presencia de un medio de induccion. La solicitud publicada de EE.

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Estas celulas pueden diferenciarse en celulas productoras de insulina y agregados productores de insulina. Se ha documentado que suplemento de próstata awc celulas progenitoras, derivadas de tejidos fetales o embrionarias, tienen el potencial de diferenciarse en una celula productora de hormonas de pancreas. Vease, por ejemplo, la patente de EE.

Las celulas madre embrionarias humanas hES se derivan de la masa celular interna del blastocisto, la fase mas temprana del desarrollo embrionario del ovulo fecundado. El suplemento de próstata awc es una etapa de pre-implantacion del embrion, una etapa antes de que el embrion se implanta en la pared uterina.

Cuando se cultivan suplemento de próstata awc una capa de alimentacion inactivada de celulas de acuerdo suplemento de próstata awc las condiciones descritas por Thompson y colaboradores Thomson, et al Proc Natl Acad Sci U. Science, Marshall, et al, Metodos Mol. Biol, las celulas de la capa interior del blastocisto pueden ser cultivadas in vitro indefinidamente en un estado indiferenciado. Celulas hES propagada correctamente tienen un potencial ilimitado para doblar y mantener su pluiripotencia; es decir, su capacidad de diferenciarse en las tres capas del embrion, ectodermo Ecmesodermo Me y endodermo En.

Cuando se cultiva como pluripotente hES, las celulas mantienen un cariotipo euploide y no son propensos a la senescencia. Anat suplemento de próstata awc,Mitsui et al, Adelgazar 10 kilos, Chambers et al, Cell Estas condiciones no permiten la ampliacion facil de celulas y un eventual terapia celular para el tratamiento de la diabetes. Los investigadores han encontrado que los tipos no embrionarios de celulas madre "celulas madre adultas" no son.

Sin embargo, un obstaculo con el aislamiento de celulas madre embrionarias es que las celulas se derivan suplemento de próstata awc embriones en la etapa de "blastocisto". La investigation con celulas madre de embriones humanos esta gravado por un debate politico y etico cargado de emociones y es probable que siga siendolo en los proximos anos.

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Ademas, se han encontrado celulas madre embrionarias humanas hES para ser tumorigenicas cuando se inyectan en animales inmunologicamente discapacitados, es decir, en el contexto de los tejidos post-natales, mientras que las celulas madre adultas no lo son.

Los atributos tumorigenicos de las celulas hES no se abordan con frecuencia, aunque este problema puede cargar a su uso en terapia de reemplazo celular en el futuro. Las cuestiones politicas, morales y eticas en torno a celulas hES y sus propiedades oncogenicas, asi como las dificultades percibidas de la expansion de las celulas madre adultas no diferenciadas en cultivo, manteniendo al suplemento de próstata awc tiempo un genoma geneticamente normal, son los principales obstaculos en el desarrollo de la terapia de reemplazo de celulas humanas.

Celulas madre pluripotentes o multipotentes se han aislado de las vellosidades corionicas, y el Kquido amniotico. Muchas celulas amnioticas y placentarias comparten suplemento de próstata awc origen comun, a saber, la masa celular interna de la morula, que da lugar a que el embrion en si, el saco vitelino, el nucleo mesenquimales de las vellosidades corionicas, el corion y amnios Crane y Suplemento de próstata awc, Prenatal Diagnosis 8: Las celulas embrionarias y fetales de las tres capas germinales durante mucho tiempo han sido identificados en el Kquido amniotico Milunsky, Suplemento de próstata awc Disorder of the Fetus Nueva York: Plenum Press,; Hoehn y Salk, Methods in Cell Biology 26, De este modo, el liquido amniotico puede proporcionar el acceso menos invasivo de las celulas madre similares a las embrionarias y fetales.

Las celulas derivadas del Kquido amniotico se han utilizado de forma rutinaria para detectar anomalias suplemento de próstata awc del feto. El Kquido amniotico es normalmente muestreado durante el segundo trimestre 16 a 22 semanas de gestation. Tecnica anterior y salud claramente la presencia de tres subpoblaciones de celulas con morfologias diferentes: celulas "liquido amniotico" AFy "celulas epiteliales" E"fibroblasto" F.

Las celulas F y AF se expanden rapidamente mientras que las celulas E muestran una curva de crecimiento mucho mas lenta y tienen una pobre eficiencia suplemento de próstata awc.

En otro ejemplo, la solicitud publicada de EE. En otro ejemplo, las celulas fetales se han aislado de liquido amniotico In't Anker et al, Blood, De una poblacion de celulas madre mesenquimales aisladas de liquido amniotico tambien se ha informado en una publication de Tsai et al Tsai et al, Human Reproduction 19, Las celulas fueron tambien positivas para el factor suplemento de próstata awc transcription embrionaria Oct Aunque publicaciones y patentes recientes han sugerido que dentro de la fibroblastica, Kquido amniotico, o subpoblaciones epiteliales existe una poblacion de celulas que muestran algunas caracteristicas de las celulas embrionarias humanas, tales como la expresion de marcadores de superficie SSEA3 y -4, la expresion del factor de transcripcion Oct-4fuerte potencial de expansion, y la diferenciacion en multiples suplemento de próstata awc de celulas; Ninguna de las tecnicas previamente publicadan han demostrado la existencia de una subpoblacion de las celulas que muestran expresion de marcadores endodermales tempranos claves, como HNF-1 beta, HNF-3 beta, SOX, y GATA-6, mientras que el mantenimiento de la expresion de marcadores ES SSEA Por lo tanto, la expresion de estos marcadores pueden ser claves en la generation de una poblacion de celulas de pancreas 13 o una poblacion de celulas productoras de hormonas pancreaticas o una hormona de production de celulas de una celula intestinal derivada de fluido amniotico.

Por lo tanto, todavia existe una necesidad significativa para desarrollar condiciones de cultivo para el.

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Prenatal Diagnosis,vol. EP A1 se refiere a un metodo para la separation de celulas madre de pancreas de un mamlfero y un metodo de identification de los mismos.

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La invencion tambien proporciona una poblacion de celulas derivadas del llquido amniotico de acuerdo con la presente invencion para uso en un metodo de tratamiento de un paciente con diabetes mellitus o a riesgo de suplemento de próstata awc diabetes. La invencion tambien proporciona el uso in vitro de la poblacion de celulas de acuerdo con la presente invencion, en suplemento de próstata awc metodo en el que las celulas de dicha poblacion se diferencian en celulas productoras de hormona pancreatica.

Se da a conocer en el presente documento un metodo para el aislamiento de celulas derivadas del llquido amniotico de mamlferos. Celulas derivadas Adelgazar 30 kilos llquido amniotico se obtienen de muestras de llquido amniotico de aproximadamente 14 a aproximadamente 23 semanas de gestation.

Alternativamente, las celulas derivadas del llquido amniotico se obtienen de muestras de llquido amniotico de aproximadamente 23 a aproximadamente 40 semanas de gestacion. En una realizacion alternativa, las celulas derivadas del llquido amniotico se obtienen a partir de muestras de llquido amniotico del segundo trimestre de la gestacion.

Alternativamente, las celulas derivadas del fluido anmiotico se obtienen suplemento de próstata awc muestras de llquido amniotico del tercer trimestre de gestacion.

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En una realizacion, las celulas derivadas del llquido amniotico cultivadas se aislan como celulas individuales y se suplemento de próstata awc clonalmente. La poblacion de celulas derivadas de fluido amniotico es sustancialmente negativa para al menos uno de los siguientes marcadores: CDOct-4, o Tra En una realizacion, la poblacion suplemento de próstata awc celulas derivadas de fluido amniotico es sustancialmente positiva para los siguientes marcadores: CD44 y SSEA4.

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